产品货号:
MQ0053
中文名称:
GV3101农杆菌感受态细胞
英文名称:
GV3101 Chemically Competent Cell
产品规格:
10×100μl|50×100μl
发货周期:
1~3天
产品价格:
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GV3101菌株为C58型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90(pTiC58DT-DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pMP90(pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。
pMP90(pTiC58DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签:Strep和gent,赋予GV3101菌株链霉素和庆大霉素抗性,适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率可达104cfu/μg。
保存条件:-80℃
基因型:
C58(rif R)Ti pMP90(pTiC58DT-DNA)(gentR/strepR)Nopaline
操作说明:
1.取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。
2.每100μl感受态加1μg(体积不大于10μl)质粒DNA,用手拨打管底混匀,依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、28℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3.加入700μl无抗生素的LB或YEB液体培养基,于28℃振荡培养2~3小时。
4.6000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50μg/ml kan时,28℃培养48h即可;平板中同时加入50μg/ml kan,20μg/ml rif时,需28℃培养60h;如果使用的平板含有50μg/ml rif则需要28℃培养72-90h)。
注意事项:
1.感受态细胞最好在冰上融化。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
注意事项:
1、加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
2、混入质粒时应轻柔操作。
3、转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4、利福平浓度不应高于25μg/μl,过高的利福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50μg/ml kan,若所用平板含有20μg/ml rif则转化效率降低到1/2。
5、培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失,但链霉素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素,Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。
相关搜索:GV3101农杆菌感受态细胞,GV3101 Chemically Competent Cell
pMP90(pTiC58DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签:Strep和gent,赋予GV3101菌株链霉素和庆大霉素抗性,适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率可达104cfu/μg。
保存条件:-80℃
基因型:
C58(rif R)Ti pMP90(pTiC58DT-DNA)(gentR/strepR)Nopaline
操作说明:
1.取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。
2.每100μl感受态加1μg(体积不大于10μl)质粒DNA,用手拨打管底混匀,依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、28℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3.加入700μl无抗生素的LB或YEB液体培养基,于28℃振荡培养2~3小时。
4.6000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50μg/ml kan时,28℃培养48h即可;平板中同时加入50μg/ml kan,20μg/ml rif时,需28℃培养60h;如果使用的平板含有50μg/ml rif则需要28℃培养72-90h)。
注意事项:
1.感受态细胞最好在冰上融化。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
注意事项:
1、加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
2、混入质粒时应轻柔操作。
3、转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4、利福平浓度不应高于25μg/μl,过高的利福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50μg/ml kan,若所用平板含有20μg/ml rif则转化效率降低到1/2。
5、培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失,但链霉素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素,Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。
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